把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號(hào)面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個(gè)不對(duì)稱的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對(duì)應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時(shí)。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽(yáng)性雜交信號(hào)的位置,同時(shí)在不對(duì)稱分布點(diǎn)的位置上作出標(biāo)記。可從底片上取下透明紙,通過(guò)對(duì)比紙上的點(diǎn)與瓊脂上的點(diǎn)來(lái)鑒定陽(yáng)性菌落。
原位雜交技術(shù)在其他生物領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用,例如:
植物學(xué)研究:在植物學(xué)研究中,原位雜交技術(shù)可以用于檢測(cè)和定位特定基因的表達(dá),研究基因組結(jié)構(gòu)和進(jìn)化。此外,還可以應(yīng)用于植物染色體組型分析、基因組印記研究等方面。
微生物學(xué)研究:在微生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究細(xì)菌、病毒等微生物的基因表達(dá)和定位,以及它們?cè)诃h(huán)境中的分布和相互作用。例如,通過(guò)標(biāo)記特異性探針,可以檢測(cè)腸道微生物群落中的特定,研究其在人體健康和疾病發(fā)生中的作用。
熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
可多重染色:利用不同的熒光染料標(biāo)記不同的探針,可以實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒庠浑s交,從而同時(shí)檢測(cè)多個(gè)序列,提高實(shí)驗(yàn)效率了。
高度創(chuàng)新性和性:FISH技術(shù)不僅可以用于研究已知基因或序列的染色體定位,還可以用于未基因或遺傳標(biāo)記及染色體畸變的研究,在基因定性、定量、整合、表達(dá)等方面的研究中頗具優(yōu)勢(shì)。